美國Abraxis健忘性貝類毒素(ASP)檢測試劑盒的詳細信息

1．概要這個軟骨藻酸（ASP）ELISA檢測方法可以很敏感的定量檢測軟骨藻酸的含量。軟骨藻酸是和健忘性貝類毒素相關的一類海藻產生的水溶性毒素。試劑盒用于定量或定性檢測檢測水樣和貝類樣品中軟骨藻酸的含量。貝類樣品需要進行樣品前處理。如果需要可以用傳統的方法例如HPLC,GC/MS來證實。2．安全說明試劑盒中的標準溶液里含有少量的軟骨藻酸。底物中包含有四甲基聯苯胺，終止液中含有稀硫酸。要避免皮膚和粘膜與終止液接觸，如果不小心接觸了請馬上用水沖洗。3．保存和穩定性試劑盒應保存在2-8℃，不要冷凍。在使用之前要把試劑盒中的溶液回復到室溫（20-25℃）。有效期內試劑盒中的試劑都可以使用。4．原理試劑盒的原理是直接競爭ELISA法，通過特異性抗體來識別軟骨藻酸。當樣品中含有軟骨藻酸時，樣品中的軟骨藻酸與軟骨藻酸酶結合物競爭結合溶液中的軟骨藻酸抗體。軟骨藻酸抗體與包被在微孔板上的羊抗鼠二抗結合。經過一步洗滌加入底物溶液，產生有色反應。產生的綠色的顏色深度與樣品中軟骨藻酸的含量成反比。加入反應停止液后使顏色由藍色轉變為黃色。用酶標儀在450nm處測定吸光度值。通過繪制標準曲線來計算樣品中軟骨藻酸的含量。5. 軟骨藻酸試劑盒的局限性和可能的干擾對在水樣中經常出現的多種有機物和無機物已近作過檢測對此試劑盒并無干擾。由于化合物的易變質性由基質反應引起的干擾是不可能完全避免的。操作不當也可能導致檢測結果錯誤，比如：試劑盒保存條件不對、錯誤的加液順序、試劑的量沒有加準確、孵育的時間太長或太短、孵育的溫度太高或太低。與其它檢測方法一樣對陽性結果要求通過其它傳統的方法來驗證。6．軟骨藻酸測定的重要性軟骨藻酸及其衍生物是一類海藻產生的水溶性毒素，主要是大亞灣擬菱形藻等微藻類生物。大亞灣擬菱形藻水華會導致貝類等濾食性生物體內軟骨藻酸的富集。ASP可以引起劑量依賴型的腹瀉、惡心、嘔吐癥狀。FDA對ASP的限量是20ppm。歐洲是20mgDA/kg。這個試劑盒可以檢測40個樣品（做兩個重復）。需要少量的樣品，檢測時間少于2小時。A．試劑盒組成：1、包被二抗的微孔板（羊抗鼠）2、標準（5種）0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 ng/ml3、1瓶對照（1ml）濃度3.5 ng/ml4、軟骨藻酸抗體溶液（鼠抗軟骨藻酸）6ml5、軟骨藻酸酶標記物6ml6、樣品稀釋液（25ml）用于稀釋樣品7、5x 濃縮洗液100ml8、顯色液（底物）TMB,16ml9、終止液12mlB 測試前準備微量移液器和吸頭是必須使用的，推薦使用排槍加液這樣可以確保整個微孔板上的孔在每個步驟的反應時間趨于一致。在做同測試時要使用同一個盒子里的試劑和標準。在操作前仔細閱讀說明書。1、使用前將所有的試劑拿到室溫（19℃-25℃）。2、從鋁箔袋中拿出要求數量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。置于4-8℃保存。3、標準液，對照，酶結合物，底物，終止液不用稀釋直接使用。4、洗液在使用前要以1：5的比例稀釋后使用（100 mL 5X 洗液加 400 mL 無離子水）5、由于終止液中含稀硫酸拿的時候要小心。C.操作步驟1、在對應的微孔中加入50μL的標準、對照和樣品（推薦做2-3個重復）2、每個測試孔都加入50 μL軟骨藻酸酶標記物溶液。3、每個測試孔都加入50 μL軟骨藻酸抗體溶液，用封口膜把微孔板蓋上，輕輕的震蕩微孔板30秒使里面的液體混勻。不要使液體灑出。4、在室溫下孵育60分鐘。5、孵育完成后，把封口膜取掉，將微孔中的溶液用力地倒入水槽中，用1 X的洗液洗板3次，每孔每次至少加入250 μL1 X的洗液。拍板，去掉殘留的洗液。6、每個測試孔加入100μL的顯色液（底物）。室溫孵育30分鐘，此步驟避免太陽光照射。7、每個測試孔加入50μL終止液。8、用酶標儀在450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）（在加入終止液15分鐘內完成）D 結果分析結果分析可以利用商業ELISA分析軟件(4-parameters,Logit/Log)。手工計算可以先計算標準的吸光度值的平均值，然后計算每個標準的%B/B0（用其它標準的吸光度值除以零標準的吸光度值乘以100%）。以每個標準的%B/B0做Y軸，以每個標準的軟骨藻酸的濃度做X軸構建標準曲線。通過利用標準曲線，把對照和樣品的%B/B0代入標準可以計算出樣品中軟骨藻酸的濃度。樣品中軟骨藻酸的含量小于0.5 ppb認為陰性。當樣品中軟骨藻酸的含量大于10.0 ppb要稀釋后再測定。