- 品牌/商標：國創儀器
- 企業類型：制造商
- 新舊程度：全新
- 原產地：合肥
9.5%狼毒素母藥
質檢方法驗證
甘肅省農藥化肥產品質量監督檢疫站
編制
二零零九年八月
1、 驗證內容及技術指標
驗證內容及技術指標：外觀、新狼毒素A質量分數、pH值（4~7）、干燥減量（%，1.0）、低溫穩定性（0±1）℃、熱貯穩定性（54±2）
℃。
2、試驗方法
2.1 抽樣
按照GB/T1605中“商品原藥采樣”規定進行。用隨機數表法確定抽樣的包裝件，終采樣量應不少于100g。
2.2鑒別試驗
在相同的高效液相色譜（HPLC）操作條件下，試樣溶液某一色譜峰保留時間與標準液新狼毒素A色譜峰的保留時間的相對差值應在1.5%以內。
2.3新狼毒素A質量分數測定
2.3.1 方法提要
采用高效液相色譜外標法，試樣以甲醇+水+乙醇為流動相，使用C18不銹鋼色譜柱和紫外檢測器。對試樣新狼毒素A進行高效液相分離及測定。
2.3.2試劑與溶液
新狼毒素A標品已知含量，≥98%；
水：新蒸二次蒸餾水
甲醇：色譜純
乙酸：分析純
2.3.3 儀器
高效液相色譜儀，具有可變波長紫外檢測器；
色譜數據處理機或色譜工作站；
色譜柱：150mm×4.6mm(id)不銹鋼柱，內裝CapcellpakC18MG5mm填充物（或具有相同柱效的其他反相色譜柱）;
過濾器：濾膜孔徑約0.45mm；
微量進樣器：50ml；
定量進樣閥；
超聲波清洗器；
2.3.4 色譜操作條件
流動相：體積比y(甲醇+水+乙醇)=60:40:1
流速：0.8ml/min
柱溫:室溫（溫度變化應不大于2℃）；
檢測波長：297mm
進樣量：20ml
保留時間：新狼素A約6.4min
上述液相色譜操作條件，系典型操作參數。可根據不同儀器特點，對給定的操作參數作適當調整，以期獲得效果。
狼毒素A母液液相色譜圖
典型的新狼毒素A母藥的液相色譜圖如上。
2.3.5 測定步驟
a) 新狼毒素A標樣溶液的配置
稱取新狼毒素A標樣0.1g(0.0002g)于50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度、搖勻。用移液管吸取上述溶液5ml，于另一50ml容量瓶中，用甲醇定容，搖勻。再用0.45mm濾膜過濾。
b)新狼毒素A母藥劑樣的配制
準確稱取1g（至0.0002g）于100ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度、搖勻。用微孔濾膜0.45mm過濾，取濾液進樣20ml。
c)測定
在上述色譜條件下，待儀器工作狀態穩定后，先注入數針標樣溶液，直至連續兩次進樣的峰面積（或峰高）相對偏差小于1%，按標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液順序進行分析。
2.3.6計算
母藥新狼毒素A的質量分數（%）按式（1）計算：
式中：
A1-標樣溶液中，新狼毒素A峰面積（或峰高）的平均值；
A2-試樣溶液中，新狼毒素A峰面積（或峰高）的平均值；
P-新狼毒素A標樣質量百分數；
m1-新狼毒素A標樣質量，g
m2-試樣質量，g
2.3.7 允許差
兩次平行測定結果不大于1%，取其算術平均值作為測定結果。
2.4 pH值的測定
按GB/T1601農藥pH值的測定方法進行。
2.5 干燥減量的測定
2.5.1儀器設備
電熱恒溫真空干燥箱:(95±2)℃;
真空泵
稱量瓶：內徑50mm，高20mm；
干燥器
2.5.2測量步驟
將稱量瓶入100℃±2℃烘箱中烘1h,取出置于干燥箱中冷卻至室溫，稱量（至0.0002g），重復上述步驟，直至稱量瓶恒重為止。在瓶內放置10g試樣，鋪平，稱量（至0.0002g），將稱量瓶放入烘箱不加蓋，開啟真空干燥烘1h，真空度為0.070pa。取出放入干燥器中，稱重。
2.5.3 計算
以質量分數表示的式樣加熱減量X2（%）按式（2）計算：
式中：
m3——試樣的重量
m4——試樣和稱瓶，g；
m5——試樣和稱量瓶烘干后的重量，g.
2.5.4 允許差
兩次平行測定結果之相對偏差應不大于10%。取其算數平均值為測定結果。
2.6 低溫穩定性
2.6.1方法提要
試樣在0℃保持1h，記錄有無固體和油狀物析出，繼續在0℃貯存7d，離心，將固體析出物沉降，記錄其體積。
2.6.2 儀器
制冷器：保持（0±2）℃；
離心管：100ml,管底刻度至0.05ml;
離心機：與離心管配套。
2.6.3 實驗步驟
取（100±1.0）ml試樣加入離心管中，在制冷器中冷卻至（0±2）℃，讓離心管及其內容物在將離心管放回制冷器，在（0±1）℃繼續放置7d。7d后，將離心管取出，在室溫（不超過20℃）下靜置3h，離心分離15min(管子頂部相對離心力500～600G，G為重力速度)，記錄管子底部離析物的體積（至0.05ml）。離析物不超過0.3ml為合格。
2.7 熱貯穩定性
2.7.1方法提要
將試樣至于安瓿瓶中，于54℃貯存14d后，對規定項目進行測定。
2.7.2儀器
恒溫箱（或恒溫水浴）：（54±2）℃；
安瓿瓶或（54±2）℃仍能密封的具塞玻璃瓶：50ml；
醫用注射器：50ml；
2.7.3 測定步驟
用注射器將30ml試樣，注入潔凈的安瓿瓶中（避免試樣接觸瓶頸），置此安瓿瓶于冰鹽浴中制冷，用高溫火焰迅速封口（避免溶劑揮發），至少封3瓶。冷卻至室溫分別稱重。將封好的安瓿瓶置于金屬容器中，再將金屬容器放入（54±2）℃恒溫箱（或恒溫水浴中），放置14d。取出，冷至室溫，將安瓿瓶外面擦拭干凈后分別稱重，質量未發生變化的試樣，于24h內按奔標準2.3規定的方法對有效成分含量進行測定。新狼毒素A相對分解率不大于5.0%為合格。
