環丙沙星快速檢測試劑盒

概述

回旋酶抑制劑分為四種亞群，恩諾沙星（代謝產物：環丙沙星）和達氟沙星屬于氟奎諾酮，是允許使用的獸用藥物。氟奎諾酮是廣譜抗菌素，廣泛應用養殖業，特別是牛、豬和雞。在過去的幾年里，氟奎諾酮的使用有所增加，大量的奎諾酮類藥物被用于預防傳染病，特別是在雞、豬和魚/蝦養殖廠。

實驗原理

本試劑盒采用免疫競爭法檢測環丙沙星。微孔板上包被有抗環丙沙星抗體。加入環丙沙星酶結合物和環丙沙星標準品或樣品，游離環丙沙星與環丙沙星結合物競爭微量反應板上的抗環丙沙星抗體，沒有結合的酶結合物被洗去。再向反應孔中加入相應反應底物TMB，作用一定時間后，結合的酶結合物將TMB轉化為藍色，轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的環丙沙星呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制

1.         已包被兔抗三聚氰胺抗體的酶聯板(Assay plate )：一塊（96孔）。

2.         標準品（Standard）：2×100ul/瓶。

3.         樣品稀釋液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。

4.         辣根過氧化物酶標記環丙沙星結合物（HRP - CPFX）：1×100ul/瓶（1：100）。

5.         辣根過氧化物酶標記環丙沙星結合物稀釋液（HRP –CPFX Diluent）：1×10ml/瓶。

6.         底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

7.         濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

8.         終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H₂SO4）。

需要的試劑和器材

1.         標準規格酶標儀

2.         高速離心機

3.         電熱恒溫培養箱

4.         超聲清洗器

5.         離子交換小柱（PCX）

6.         氮氣吹干儀

7.         干凈的試管和Eppendof管

8.         系列可調節移液器及吸頭，檢測樣品較多時，用多通道移液器

9.         蒸餾水，容量瓶等

樣品制備：

牛奶不需要處理；肉、魚、蝦等需均質、提取、離心、稀釋。

標本的稀釋原則：

首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。