一、 原理  本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測水產和雞肉等組織樣本中的己烯雌酚，在微孔條上預包被上偶聯抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的原理來進行的，樣本中的己烯雌酚和微孔條上預包被偶聯抗原競爭抗己烯雌酚的抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣品中的己烯雌酚含量與樣品的吸光度值呈反比，與標準曲線比較即可得出己烯雌酚含量。 二、 試劑盒技術指標：試劑盒靈敏度：          0.1ppb樣本檢測下限：組織（蝦、魚）           0.1ppb豬肉/肝 雞肉/肝            2ppb飼料                      20ppb尿液                      0.6ppb回收率：飼料                      90±10%組織                      85±10%尿液                      80±10%交叉反應率：己烯雌酚                  100%雙烯雌酚                  35%己烷雌酚                  10%己炔雌二醇                <0.1%雌三醇                    <0.1% 三、試劑盒組成1．酶標板：96T/8孔2．標準品液： 0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb（1.0mL/瓶）3．酶標記物            12mL4．抗體工作液          7mL5．底物緩沖液          7 mL6．底物液              7 mL7．終止液              7 mL8．20倍濃縮洗滌液     50 mL     用去離子水稀釋到1000 mL9．20倍濃縮復溶液     12mL     用去離子水稀釋到240 mL 四、樣本前處理步驟樣本處理前須知：1．實驗中必須使用性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。2．實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。樣本前處理需配制：配液1：6M H₃PO₄   100mL   濃H₃PO₄（含量85%） 加去離子水150mL混合均勻配液2：1M NaOH    4g      NaOH     加去離子水100mL溶解配液3：2M NaOH    8g        NaOH   加去離子水100mL溶解配液4：乙腈-丙酮    80mL      乙腈    加入丙酮20mL混合均勻 樣本的處理：（a）飼料樣本1．稱取2±0.05g搗粹后的飼料樣本，加入8mL乙腈，振搖10min，15℃，3000g以上，離心10min；2．取2mL上清液，60℃氮氣/空氣吹干；3．加入0.5mL氯仿，渦動20s，加入2mL 1M NaOH，渦動30s，3000g以上，離心5min；4．取1mL上清液，加入100μL 6M H3PO4，渦動5s； 不同樣本按如下方法稀釋：配合料：取50μL，加入950μL的復溶液，渦動混勻，取50μL /孔用于檢測。濃縮料/預混料：取25μL，加入975μL復溶液，渦動混勻，取50μL /孔用于檢測。取50μL用于分析。配合料稀釋倍數：100       濃縮料、預混料稀釋倍數：200  （b）組織（雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚）1．稱取2±0.05g勻漿后的樣本，加入6mL乙腈-丙酮，振搖10min，15℃，3000g以上，離心10min。2．取3mL上清液，60℃氮氣/空氣吹干。加入0.5mL氯仿，渦動20s，加入2mL 2M NaOH，渦動30s，3000g以上，離心5min。3．取1mL上清液，加入200μL 6M H3PO4，渦動5s。4．加入3mL乙腈萃取，振蕩10min，室溫3000g以上，離心10min，取上層有機相， 60℃氮氣/空氣吹干。用1mL復溶液溶解干燥的殘留物。 不同樣本按如下方法稀釋：蝦魚：直接取50μL水相用于檢測。稀釋倍數：2豬肉/肝、雞肉/肝：取50μL水相加入450μL稀釋后的復溶液，渦動均勻；取50μL用于檢測。稀釋倍數：20（c）尿液1．取2mL尿液到離心管中，室溫3000g以上，離心10min，直至清亮；2．移取1mL清亮尿液至離心管中，加入1mL　1M NaOH強烈振蕩5min；3．加入100μL  6M H3PO4，渦動30 s；4．再加入8mL氯仿進行萃取，振蕩10min。15℃，3000g以上，離心10min；5．去掉上層的水相，取下層有機相4 mL，60℃氮氣/空氣吹干；6．用3mL稀釋后的復溶液干燥的殘留物；取50μL 用于分析。樣本稀釋倍數：6