1.         原理本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的孔雀石綠結(jié)晶紫和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)孔雀石綠抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物孔雀石綠結(jié)晶紫的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較可得出相應(yīng)孔雀石綠結(jié)晶紫的含量。 2.     試劑盒組成（1）       酶標(biāo)板：   96 T/8孔（2）       標(biāo)準(zhǔn)品液:（1.0 mL/瓶）0 ppb、0.05 ppb、0.15 ppb、0.45 ppb、1.35 ppb、4.05 ppb。（3）       酶標(biāo)記物：     1瓶（12 mL）。（4）       抗體工作液：   1瓶（7 mL）。（5）       底物緩沖液：   1瓶（7 mL）。（6）       底物液：       1瓶（7 mL）。（7）       終止液：       1瓶（7 mL）。（8）       20倍濃縮洗液：1瓶（50 mL）加蒸餾水稀釋到1000 mL。（9）       1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品液：（0.2 mL）。（10）   提取液A （50 mL）（11）   提取液B （50 mL） 3.         需要但試劑盒中不提供的器材和試劑（1）設(shè)備…微孔板酶標(biāo)儀(450 nm)…均質(zhì)器…振蕩器…離心機(jī)…各種量程的微量移液器（2）試劑…蒸餾水…環(huán)已烷 5.         儲(chǔ)存條件（1） 2-8 ℃保存，切勿冷凍。　（2） 將不用的酶標(biāo)板放進(jìn)原袋中重新密封。（3） 酶標(biāo)記物和顯色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。 6.         樣品處理（1）       魚/蝦樣品的準(zhǔn)備（稀釋倍數(shù)10）     先將魚肉勻質(zhì)后，稱取0.5 g樣品，加入500 μL的0.125 mol/L(Ph4.5)乙酸緩沖液，200ul的0.25g/mL鹽酸羥胺，300ul的0.05mol/L對(duì)甲苯磺酸，震蕩15分鐘使之成勻漿，12000rpm離心5min，然后取上清用PBST稀釋5倍，用作ELISA檢測(cè)（2）       水質(zhì)樣品（稀釋倍數(shù)1）離心后取50μl作ELISA分析。 7.         免疫分析時(shí)試劑的準(zhǔn)備（1）注意事項(xiàng)A）使用之前將所有試劑平衡至室溫。B）使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。C）在使用中不要讓微孔干燥。D）EIA分析的重復(fù)性，很大程度上取決于洗板的一致性，仔細(xì)按照推薦的洗板順序操作是EIA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。E）在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。（2）濃縮洗滌液使用前應(yīng)根據(jù)所需量進(jìn)行20倍稀釋，即按1mL濃縮洗滌液加入19mL蒸餾水的比例進(jìn)行稀釋。 8.         標(biāo)準(zhǔn)樣品配制方法：（1）用稀釋好的洗液將1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品液稀釋1000倍，變成1000ng/mL，振蕩混勻。（2）準(zhǔn)備5個(gè)1 mL瓶子，其中一個(gè)加入1000 μL洗液，其余的分別加入600 μL洗液。（3）在1000 μL洗液瓶子中先吸出4.05 μL的洗液，然后加入4.05 μL的1000 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品，混勻，使其濃度為4.05 ng/mL，作好記號(hào)；（4）再從4.05ng/mL的瓶子中吸出300 μL加入其中一個(gè)600 μL洗液的瓶子中，使其濃度為1.35 ng/mL，混勻，作好記號(hào)；（5）再從1.35 ng/mL的瓶子中吸出300 μL加入其中一個(gè)600 μL洗液的瓶子中，使其濃度為0.45 ng/mL，混勻，作好記號(hào)；（6）再從0.45 ng/mL的瓶子中吸出300 μL加入其中一個(gè)600 μL洗液的瓶子中，使其濃度為0.15 ng/mL，混勻，作好記號(hào)；（7）再從0.15ng/mL的瓶子中吸出300 μL加入其中一個(gè)600 μL洗液的瓶子中，使其濃度為0.05 ng/mL，混勻，作好記號(hào)。  9.         測(cè)定程序（1）將標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所需微量反應(yīng)板（均需2個(gè)平行試驗(yàn)）放在反應(yīng)架上。（2）加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)液或處理好的樣品到各自的微孔板中。（3）加入50μl已稀釋的抗體應(yīng)用液加入微量反應(yīng)板，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后，室溫下反應(yīng)20分鐘。（4）棄去孔中液體，并將微孔板剩余殘液在吸水紙上拍干。每孔注滿稀釋好的洗液，輕輕振蕩，放置2分鐘，棄去孔中液體，并在吸水紙上拍干，重復(fù)5次。（5）加入100μl酶標(biāo)記物應(yīng)用液到微孔板中，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后， 室溫下反應(yīng)15分鐘。（6）棄去孔中的液體，并在吸水紙上拍干，每孔注滿稀釋好的洗液，輕輕振蕩，放置2分鐘，棄去孔中液體，并在吸水紙上拍干，重復(fù)5次。（7）加底物緩沖液50μl，再加入底物液50μl，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后，在室溫避光處孵育10分鐘。（8）加入50μl終止液到微孔板中，混合好在450nm處測(cè)量吸光度值，在加入停止液后10分鐘內(nèi)讀取光度值。